2.8.1.3. Del estudio químico.

      1. Recolección, secado, molienda y extracción de los metabolitos secundarios de la especie, la planta en general crece de manera silvestre en nuestro Valle del Mantaro entre los 3000 y 3500 m.s.n.m., la recolección de preferencia se ha de realizar en el mes de setiembre cuando la especie se encuentra en la etapa de la floración. La especie una vez obtenida se ha de confrontar con el Museo de Historia Natural "Javier Prado" de la Universidad Nacional Mayor de San Marcos, se continuara con la limpieza exterior del material recolectado, se lavará los tallos con agua corriente y una escobilla, retirando todo residuo de tierra y las raíces laterales, luego se escurrirá y estabilizara con alcohol etílico. También se desecaran los tallos y serán molidos en molino de cuchillas y tamizado con malla # 3, obteniéndose un polvo seco y homogéneo (30).

      • El polvo seco fue macerado en solución hidroalcohólica (EtOH 96 G.L.) por 7 días en oscuridad, luego será filtrado con una gasa, el líquido filtrado, será concentrado resultando el Extracto alcohólico total; a partir de ese extracto se separará cuatro fracciones por flash cromatographic. (cromatografía en columna rápida)

    b. Marcha de solubilidad y marcha fitoquímica.

     

    Marcha de solubilidad.

    En 4 tubos de ensayo se colocará una pequeña porcion del extracto hidroalcohólico total de los tallos subterráneos y se le agregará a cada uno 2 mL del solvente respectivo H2O, MeOH, CHCl3 y n-hexano, se agitaran y observaran los resultados (31).

    Marcha fitoquímica.

    Se deran realizar las siguientes reacciones químicas preliminares en el extracto hidroalcohólico total:

    Reacción con FeCl3 (1 % en H1 % en H2O) - Es característica para compuetos fenólicos, resultan coloraciones verdes a marrón para derivados de catecol, y coloraciones azuladas para derivados de piragalol.

    Reacción con gelatina / NaCl (1g de gelatina + 100 mL H2O + 10g NaCl). Un precipitado abundante indica presencia de taninos (32).

    Reacción de Shinoda.- En una lámina para reaccion a la gota, se deposita una solución poco coloreadadel extracto vegetal, se agregan pequeños trozos de Mg. Metálico y gotas de HCl concentrado, las coloraciones que se generan indicaran la presencia y tipo de flavonoide.

    Reación de Dragendorff (yoduro de bismuto y potasio).- un precipitado o coloración rojo naranja, indicará la presencia de alcaloides.

    Reaacción de Mayer (yoduro de mercurio y potasio).- Un precipitado blanco inmediato, indicará la presencia de alcaloides.

    Índice afro simétrico o prueba de la espuma.- Para detectar la presencia de saponinas; en un tubo de ensayo se depositaran 0,5g del extracto vegetal, y 10 mL de agua destilada. Agitar por 30 segundos, se considera positiva si la altura de la espuma es mayor de 5 mm después de los 15 minutos de su aparición (33).

    Reacción de Lieberam-Burchard - A 1 mg del extracto se le agregan pocas gotas de ácido acético + 3 mL de Ac2O/H2SO4 (50:1), una coloración verde o azul verdoso, indica la presencia de un núcleo esteroidal o tripertenoidal.

     

    Volver al Indice de estudio